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急性髓系白血病完全培养基

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    急性髓系白血病完全培养基说明书02.14-02.pdf

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产品说明
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使用说明
产品说明

  急性髓系白血病培养基是一种为增进人源急性髓系白血病原代细胞体外生长而设计的完全培养基。它是一种无菌的液体混淆系统,含有必须和非必须的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、生长因子、微量矿物质等。培养基基于碳酸氢盐的缓冲体系,在5% CO2、37℃空气的培养箱中平衡时,pH值为7.4。该培养基的配方(定量和定性),可以提供一个合适的平衡的体外培养情况,选择性地增进人源急性髓系白血病原代细胞的生长。

使用说明

  1. 样品疏散

  (1) 使用移液器将抗凝管中的外周血或骨髓样本混匀,转移至15 mL无菌离心管中,1500 rpm 离心5 min;

  (2) 弃血浆,向血细胞沉淀中加入3~5倍1 x PBS稀释至9 mL,充分混匀;

  (3) 另取15 mL离心管,加入6 mL人外周血淋巴细胞疏散液,倾斜缓慢地加入上述稀释的血细胞沉淀,与疏散液明显分层,设置转速400 g、升速2、降速0、温度25 ℃,离心30 min;

  (4) 离心后,离心管中由上至下细胞分四层(PBS层、环状乳白色细胞层、疏散液层、红细胞层),移液器环形吸取白细胞层至预先加入5 mL 1 x PBS的15 mL离心管中,轻轻混匀洗涤细胞,1500 rpm室温离心3 min;

  (5) 弃上清,加入6 mL 红细胞裂解液重悬细胞沉淀,4 ℃裂解15~20 min,中间倒置混匀一次,1500 rpm室温离心3 min;

  (6) 弃上清,加入1~5 mL完全培养基重悬细胞沉淀,活细胞计数后(细胞活率至少>50%),接种活细胞于培养瓶/板,置37 ℃、5%二氧化碳培养箱中培养。

  2. 细胞传代

  (1) 镜下视察细胞形态,待悬浮细胞长满至 80%~90% 时即可传代;

  (2) 将细胞悬液转移至15 mL离心管,1500 rpm室温离心3 min;

  (3) 弃上清,以1~2 mL培养基重悬细胞,活细胞计数,接种活细胞于培养瓶/板,置37 ℃、5%二氧化碳培养箱中培养。

要害词:
急性髓系白血病完全培养基
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